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        HPLC流動相的配制與注意事項!

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        瀏覽:- 發(fā)布日期:2023-06-27 15:44:45【

        一、 HPLC試劑要求

        甲醇,乙腈必須為色譜級純及以上級別,其他試劑也盡量使用色譜級純,試劑標(biāo)簽上都會標(biāo)有HPLC字樣。水為超純水或者購買商品化的的純凈水例如屈臣氏。

        二、流動相配制注意事項

        一般來說,溶劑的混合通常按體積比(V/V)。

        體積混合有三種方式,例如95%乙腈水溶液:

        方式1:可以用量筒量取乙腈950ml,再量取水50ml,兩種液體在瓶內(nèi)充分搖晃混合。

        方式2:可以先取950ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。

        方式3:可以先取50ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。

        這三種方式配置得到的流動相組成都是不同的,即使不考慮其他方面因素,保留時間也不會相同。一般情況推薦使用方式1 來配置流動相。

        一、 HPLC試劑要求

        甲醇,乙腈必須為色譜級純及以上級別,其他試劑也盡量使用色譜級純,試劑標(biāo)簽上都會標(biāo)有HPLC字樣。水為超純水或者購買商品化的的純凈水例如屈臣氏。

        二、流動相配制注意事項

        一般來說,溶劑的混合通常按體積比(V/V)。

        體積混合有三種方式,例如95%乙腈水溶液:

        方式1:可以用量筒量取乙腈950ml,再量取水50ml,兩種液體在瓶內(nèi)充分搖晃混合。

        方式2:可以先取950ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。

        方式3:可以先取50ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。

        這三種方式配置得到的流動相組成都是不同的,即使不考慮其他方面因素,保留時間也不會相同。一般情況推薦使用方式1 來配置流動相。

        三、含緩沖鹽流動相的配制需注意的事項

        配制緩沖鹽所使用的鹽試劑需為色譜純,稱樣需選擇量程適宜的天平且每天使用前對天平校正。流動相需過0.45μm或0.22μm濾膜過濾并超聲脫氣20min以上。若配有在線脫氣機(jī)可適當(dāng)減少脫氣時間。

        注意:不得將裝流動相的容器直接放置與超聲儀內(nèi)(容易破碎),需放與篩網(wǎng)上進(jìn)行超聲。

        四、調(diào)節(jié)流動相pH值

        采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時,調(diào)節(jié)流動相的pH值的目的是為抑制樣品組分的解離,增加組分在固定相上的保留,并改善樣品的峰形。

        (1)對于弱酸樣品,流動相的pH值越小,組分的k值越大,當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pKa值時,弱酸主要以分子形式存在;分析弱酸樣品時,通常在流動相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液。

        (2)對于弱堿樣品,情況相反。分析弱堿樣品時,通常在流動相中加入少量弱堿,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。流動相中加入有機(jī)胺可以減弱堿性溶質(zhì)與殘余硅醇基的強(qiáng)相互作用,減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象。所以在這種情況下有機(jī)胺(如三乙胺)也被稱為除尾劑或者減尾劑。

        五、流動相的使用注意事項

        1)所用流動相必須預(yù)先濾過和脫氣,流動相一般貯存于玻璃容器內(nèi)。貯存容器一定要蓋嚴(yán),防止溶劑揮發(fā)引起組成變化;

        2)磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉,應(yīng)盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,不要長期貯存;

        3)容器應(yīng)定期清洗,特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子,以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長的微生物;


        乙腈


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