液相色譜的6種檢測(cè)器介紹

檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)，常用檢測(cè)器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。

檢測(cè)器分類(lèi)：

A.選擇性檢測(cè)器：組分性質(zhì)
1、紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器(UVD)

2、熒光檢測(cè)器(FD)

B.通用型檢測(cè)器：總體性質(zhì)

3、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)

4、電化學(xué)檢測(cè)器(ED)

5、示差折光檢測(cè)器(RID)
01

紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器

紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器（ultraviolet－visible detector，UVD）是HPLC中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測(cè)器。其特點(diǎn)是靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對(duì)強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測(cè)限可達(dá)1ng，檢測(cè)后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用。紫外可見(jiàn)檢測(cè)器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計(jì)相似，實(shí)際上就是裝有流動(dòng)地的紫外可見(jiàn)光度計(jì)。

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的獨(dú)特檢測(cè)原理為，首先將柱洗脫液霧化形成氣溶膠，然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā)，最后余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測(cè)池中得到檢測(cè)。1、霧化：液體流動(dòng)相在載氣壓力的作用下在霧化室內(nèi)轉(zhuǎn)變成細(xì)小的液滴，從而使溶劑更易于蒸發(fā)。液滴的大小和均勻性是保證檢測(cè)器的靈敏度和重復(fù)性的重要因素。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，通過(guò)對(duì)氣壓和溫度的精確控制，確保在霧化室內(nèi)形成一個(gè)較窄的液滴尺寸分布，使液滴蒸發(fā)所需要的溫度大大降低。
2、蒸發(fā)：載氣把液滴從霧化室運(yùn)送到漂移管進(jìn)行蒸發(fā)。在漂移管中，溶劑被除去，留下微?；蚣?nèi)苜|(zhì)的小滴。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器采用低溫蒸發(fā)模式，維持了顆粒的均勻性，對(duì)半揮發(fā)性物質(zhì)和熱敏性化合物同樣具有較好的靈敏度。
3、檢測(cè)：光源采用激光，溶質(zhì)顆粒從漂移管出來(lái)后進(jìn)入光檢測(cè)池，并穿過(guò)激光光束。被溶質(zhì)顆粒散射的光通過(guò)光電倍增管進(jìn)行收集。溶質(zhì)顆粒在進(jìn)入光檢測(cè)池時(shí)被輔助載氣所包封，避免溶質(zhì)在檢測(cè)池內(nèi)的分散和沉淀在壁上，極大增強(qiáng)了檢測(cè)靈敏度并極大地降低了檢測(cè)池表面的污染。

03

示差折光檢測(cè)器

示差折光檢測(cè)器（differential refractive Index detector，RID）是一種濃度型通用檢測(cè)器，對(duì)所有溶質(zhì)都有響應(yīng)，某些不能用選擇性檢測(cè)器檢測(cè)的組分，如高分子化合物、糖類(lèi)、脂肪烷烴等，可用示差檢測(cè)器檢測(cè)。示差檢測(cè)器是基于連續(xù)測(cè)定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來(lái)測(cè)定樣品含量的。
光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí)，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會(huì)產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數(shù)不同，就可被檢測(cè)，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內(nèi)檢測(cè)器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。

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電化學(xué)檢測(cè)器

電化學(xué)檢測(cè)器（electrochemical detector，ED）主要有安培、極譜、庫(kù)侖、電位、電導(dǎo)等檢測(cè)器，屬選擇性檢測(cè)器，可檢測(cè)具有電活性的化合物。目前它已在各種無(wú)機(jī)和有機(jī)陰陽(yáng)離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環(huán)境污染物、生化制品、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測(cè)定中獲得了廣泛的應(yīng)用。其中，電導(dǎo)檢測(cè)器在離子色譜中應(yīng)用最多。電化學(xué)檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是：①靈敏度高，最小檢測(cè)量～般為ng級(jí)，有目可達(dá)pg級(jí)；②選擇性好，可測(cè)定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)；③線性范圍寬，一般為4～5個(gè)數(shù)量級(jí)；④設(shè)備簡(jiǎn)單，成本較低；⑤易于自動(dòng)操作。

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化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器

化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器（Chemiluminescence detector，CD）是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種快速、靈敏的新型檢測(cè)器，因其設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)廉、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢(shì)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來(lái)自化學(xué)反應(yīng)，故叫作化學(xué)發(fā)光。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來(lái)后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。
這種檢測(cè)器不需要光源，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過(guò)光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào)，就可進(jìn)行檢測(cè)。這種檢測(cè)器的最小檢出量可達(dá)10-12g。

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蒸發(fā)光散射檢測(cè)器

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（EvaporativeLight-scatteringDetector , ELSD），能檢測(cè)不含發(fā)色團(tuán)的化合物，如：碳水化合物、脂類(lèi)、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性劑、藥物(人參皂苷、黃芪甲苷)，并在沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品和化合物結(jié)構(gòu)參數(shù)未知的情況下檢測(cè)未知化合物 。

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的獨(dú)特檢測(cè)原理為，首先將柱洗脫液霧化形成氣溶膠，然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā)，最后余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測(cè)池中得到檢測(cè)。1、霧化：液體流動(dòng)相在載氣壓力的作用下在霧化室內(nèi)轉(zhuǎn)變成細(xì)小的液滴，從而使溶劑更易于蒸發(fā)。液滴的大小和均勻性是保證檢測(cè)器的靈敏度和重復(fù)性的重要因素。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，通過(guò)對(duì)氣壓和溫度的精確控制，確保在霧化室內(nèi)形成一個(gè)較窄的液滴尺寸分布，使液滴蒸發(fā)所需要的溫度大大降低。
2、蒸發(fā)：載氣把液滴從霧化室運(yùn)送到漂移管進(jìn)行蒸發(fā)。在漂移管中，溶劑被除去，留下微?；蚣?nèi)苜|(zhì)的小滴。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器采用低溫蒸發(fā)模式，維持了顆粒的均勻性，對(duì)半揮發(fā)性物質(zhì)和熱敏性化合物同樣具有較好的靈敏度。
3、檢測(cè)：光源采用激光，溶質(zhì)顆粒從漂移管出來(lái)后進(jìn)入光檢測(cè)池，并穿過(guò)激光光束。被溶質(zhì)顆粒散射的光通過(guò)光電倍增管進(jìn)行收集。溶質(zhì)顆粒在進(jìn)入光檢測(cè)池時(shí)被輔助載氣所包封，避免溶質(zhì)在檢測(cè)池內(nèi)的分散和沉淀在壁上，極大增強(qiáng)了檢測(cè)靈敏度并極大地降低了檢測(cè)池表面的污染。

不同于紫外和熒光檢測(cè)器，ELSD的響應(yīng)不依賴與樣品的光學(xué)特性，任何揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品均能被檢測(cè)，不受其官能團(tuán)的影響。敏度比示差折光檢測(cè)器高，對(duì)溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。

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