我經(jīng)常開玩笑說，要保護(hù)色譜柱以得到最長壽命的方法就是不要開封色譜柱。一旦開始使用，色譜柱的壽命就逐漸衰減一直到用壞為止。而影響色譜柱壽命的兩個主要因素是樣品中的雜質(zhì)和顆粒，因此如果我們能夠在進(jìn)樣前去除樣品中的雜質(zhì)和顆粒，色譜柱的壽命一定會延長。

前處理的方法包括固相萃取（SPE），液液萃取和其他的過濾方法。簡單地說，如果在樣品進(jìn)入色譜柱前能大量減少其中的污染物，色譜柱的壽命一定會延長，但是同時我們也必須考慮花在前處理的時間和費(fèi)用是否能得到合理的回報。如果目前使用的色譜柱已經(jīng)達(dá)到500針的進(jìn)樣量，而使用前處理所增加的時間和費(fèi)用，如果需要將色譜柱的壽命由進(jìn)樣500針增加到2500針才劃得來的話，就必須好好考慮是否前處理有其經(jīng)濟(jì)效益。但是如果進(jìn)血漿樣品，不經(jīng)過前處理，可能不到10針柱子就廢了，這時候前處理就非常有必要了。但是除了經(jīng)濟(jì)效益以外，對于使不使用前處理，對色譜數(shù)據(jù)的優(yōu)劣也必須做一個比較。在我們實驗室中，這些前處理往往能夠讓我們即使在更低的濃度下也能收集到有效的數(shù)據(jù)，也能讓我們得到更一致的結(jié)果。

不管有沒有使用前處理，建議所有的樣品在進(jìn)樣前經(jīng)過過濾或是離心處理。例如當(dāng)樣品經(jīng)過濾膜可以濾除顆粒從而減少堵塞色譜柱的篩板，濾膜的孔隙大小必須小于色譜柱的篩板孔徑大小。一般大于3μm顆粒的色譜柱使用2μm大小的篩板，3μm顆粒的色譜柱則使用0.5μm的篩板，而小于3μm顆粒的色譜柱一般使用0.2μm的篩板，因此最通用的0.45μm的濾膜基本可以用在除了亞2μm顆粒以外所有的色譜柱；對于亞2μm顆粒的色譜柱，一般使用0.2μm大小孔隙的濾膜。大多濾膜是事先封裝好，可以直接接在注射器進(jìn)行過濾或是作為96孔板的過濾板。

雖然使用濾膜是有效果，但是建議首先考量以下四點：

（1）濾膜并不便宜，雖然每一片的單價并不是很貴，但是加起來的費(fèi)用就不便宜了；

（2）過濾會花費(fèi)額外的時間，使用0.5μm濾膜過濾很慢，而使用0.2μm濾膜就更慢了；

（3）嚴(yán)格地講，一旦過濾一個樣品，對其他樣品，不管有沒有必要過濾，都得過濾，以免出現(xiàn)不必要的變量干擾實驗數(shù)據(jù)；

（4）一旦使用過濾，對方法開發(fā)進(jìn)行驗證時，也必須驗證過濾程序。由于過濾過程往往會損失樣品，因此我們需要確定是否存在不同成分損失程度不一致的情況，特別在高濃度和低濃度的時候。

由于使用濾膜是費(fèi)時費(fèi)錢的工作，因此每個實驗室要先做評估是否值得。但是不可否認(rèn)，使用濾膜過濾樣品在絕大多數(shù)的情形下是可以增長色譜柱的壽命。

另外可以取代或是補(bǔ)充濾膜過濾的方法就是進(jìn)樣前使用離心處理樣品。這是簡單又經(jīng)濟(jì)的方法。離心后，一些容易堵塞篩板的大顆粒會沉淀在離心管底部，然后可以很簡單取樣進(jìn)行分析。多年來我們一直使用這種方法在蛋白樣品的分析，幾乎沒有發(fā)生過因為顆粒堵塞色譜柱的問題。我曾經(jīng)有過在使用UHPLC時，雖然樣品經(jīng)過0.2μm的濾膜過濾但是還是有些渾濁，進(jìn)這種樣品而造成色譜柱堵塞的經(jīng)歷，但是一旦渾濁的樣品經(jīng)過離心后，取不再渾濁的樣品進(jìn)樣，色譜柱堵塞的問題也解決了。

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