從整體總的來說凝膠成像(系統(tǒng))可應(yīng)用于:蛋白質(zhì)、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結(jié)果作定性分析。
應(yīng)用范圍
分子量定量
對于一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對膠上DNA Marker條帶的已知分子量注釋,自動生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結(jié)果較肉眼觀察估計要準確很多。
密度定量
一般常用的測定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區(qū)分各個長度片段的濃度。利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標準條帶進行密度標定以后,可以方便的單擊其他未知條帶,根據(jù)與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對PA GE蛋白膠條帶的濃度測定。
密度掃描
在分子生物學和生物工程研究中,我們最常用到的是對蛋白表達產(chǎn)物占整個菌體蛋白的百分含量的計算。傳統(tǒng)的方法就是利用專用的密度掃描,但利用生物分析軟件結(jié)合現(xiàn)在實驗室常規(guī)配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項工作。
PCR定量
PCR定量主要是指,如果PCR實驗擴增出來的條帶不是一條,那么可以利用軟件計算出各個條帶占總體條帶的相對百分數(shù)。就此功能而言,與密度掃描類似,但實際在原理上并不相同。PCR定量是對選定的幾條帶進行相對密度定量并計算其占總和的百分數(shù),密度掃描時并對選擇區(qū)域生成縱向掃描曲線圖并積分。
操作流程
1.打開暗箱門,放膠于相應(yīng)的透照臺(紫外觀測核酸膠;白光觀測蛋白膠).
2.關(guān)暗箱門,鼠標點開屏幕上Bio-capt圖標。
3.按凝膠儀箱體上部照明燈開關(guān),使處于開啟狀態(tài)。
4.鼠標點擊屏幕右上角的“Realtime"操作框,調(diào)整好凝膠的擺放位置。
5.關(guān)閉前述照明燈,打開右下角右側(cè)透照臺總開關(guān),選擇左側(cè)分開關(guān)至相應(yīng)的紫外或白光透照臺。
6.鼠標點擊屏幕右側(cè)"Realtime"下方“Intergrationtime"操作框,調(diào)整其下的滾動標至適當?shù)奈恢?,使圖像更清晰。
7.感覺圖像滿意后,點擊"Freeze”凍結(jié)并保存圖像。
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