高壓蒸汽滅菌，用高溫加高壓滅菌，不僅可殺死一般的細菌、真菌等微生物，對芽孢、孢子也有殺滅效果，是最可靠、應用最普遍的物理滅菌法。那么，如何正確的是使用高壓蒸汽滅菌鍋呢？

1.滅菌物品的包裝和容器要合適

首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。需要滅菌的物品按需要分類包裝，物品包裝用線繩捆扎，以不松動散開為宜，不宜過緊，培養(yǎng)皿等器皿需要用牛皮紙包扎。

2.滅菌物品裝放應合理

滅菌鍋內(nèi)物品不能過擠，不能超過鍋內(nèi)容量。盡量將同類物品裝在同一鍋內(nèi)滅菌。若有不同類物品裝放在一起，應以難達到滅菌物品的所需溫度和時間為準。物品裝放時，上下左右均應交叉錯開，留出縫隙，使蒸汽容易穿透。大滅菌包應立著放上層，小包放下層，布類和金屬類物品同時滅菌時，應將金屬類物品包放在下層，使兩者受熱基本一致，并防止金屬物品滅菌中產(chǎn)生的冷凝水弄濕包布。
加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。

3.排盡冷空氣

打開電源加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。使用高壓蒸汽滅菌器時，最關(guān)鍵的是將鍋內(nèi)空氣排盡。如鍋內(nèi)有空氣，則氣壓針所指的壓強不是飽和蒸汽產(chǎn)生的壓強。相同的壓強，混有空氣的蒸汽其溫度低于飽和蒸汽所產(chǎn)生的溫度。因此完全排除鍋內(nèi)空氣使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。

常用方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。關(guān)閥再通電后，壓力表上升達到0.1MPa時，開始計時，維持壓力到指定的時間。

4.合理計算滅菌時間

待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。

滅菌時間包括：穿透時間，從鍋內(nèi)達到滅菌溫度開始到鍋內(nèi)最難達到的部位也達到此溫度所需要的時間；維持時間，即殺滅微生物所需要的時間，一般以殺滅嗜熱脂肪桿菌芽胞所需時間來表示；安全時間，為使滅菌得到確切保證所需要增加的時間，一般為熱死亡時間的一半，其長短視滅菌物品而定。

對易導熱的金屬器材的滅菌，不需要安全時間。在滅菌時間內(nèi)，要注意觀察壓力表，以保持規(guī)定的壓力，維持到滅菌時間為止。在滅菌過程中，如有壓力、溫度下降，應重新升溫升壓，重新計時。

5.開蓋操作

達到滅菌時間后即可切斷電源，一般當壓力表的壓力降至0之后，再打開排氣閥。有時，在壓力降到0.05MPa，可緩慢放出蒸汽，注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。當壓力降到零后才能開蓋，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。取出培養(yǎng)基擺在平臺上以待冷凝，不可以長久不取出，否則容易引起培養(yǎng)基成分變化以至無法制作斜面培養(yǎng)基。

如果因為久不放氣導致鍋爐內(nèi)產(chǎn)生負壓、蓋子打不開，可以將放氣閥打開，讓空氣進入，內(nèi)外壓力平衡后蓋子就可以打開了。取無菌物品時，要嚴格無菌操作。同時應分類放置，順序發(fā)放取用。

6.高壓滅菌時間控制

如無菌水、栽培介質(zhì)、接種用具，可以延長滅菌時間或提高壓力。而培養(yǎng)基要嚴格遵守保壓時間，既要保壓徹底，又要防止培養(yǎng)基中的成分變質(zhì)或效力降低，不能隨意延長時間。

另外，含有鹽分的液體漏出或溢出時，一定要及時擦干凈，沿著蓋子的密封圈要徹底擦干，否則會腐蝕容器和管道。不要在爆炸性氣體附近使用儀器。

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