1、首先將高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜；

2、放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品，注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果，三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞；

3、加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)，再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣；

4、高壓蒸汽滅菌鍋用電爐或煤氣加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣，待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升，當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間，本實(shí)驗(yàn)用1.05kg/cm2，121.3℃，20分鐘滅菌；

5、高壓蒸汽滅菌鍋滅菌所需時間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至0時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品，如果壓力未降到0時，打開排氣閥，就會因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染；

6、將高壓蒸汽滅菌鍋取出的滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢查若無雜菌生長，即可待用。

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