高效液相色譜是屬于易學(xué)難用的儀器，特別講究“正確使用” 和經(jīng)驗。

液相工作者接觸最多的是流動相，流動相是造成液相色譜各種問題的主要源頭。

液相色譜儀最常見的故障一是堵，二是漏。下面就這兩點分別展開討論。（注：流動相以甲醇為例，色譜柱以C18為例）“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。

高效液相色譜“堵”的原因之一：配制流動相時細(xì)菌污染。

堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，最主要原因就是流動相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的主要來源就是細(xì)菌。

首先我們要認(rèn)識到，一般的國產(chǎn)甲醇其實不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì)，也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細(xì)菌。新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會長菌，而這些細(xì)菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。

時間過久,濾頭黏附細(xì)菌導(dǎo)致泵液不準(zhǔn)

高效液相色譜解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。這里有兩種方式推薦：

（1）最理想的方式當(dāng)然是購買實驗室專用純水機(jī)，既方便又可靠，質(zhì)量也放心。唯一的缺點就是價格不菲。

（2） 成箱購買市售品牌純凈水，如500ml一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。

圖片

這里特別指出一個細(xì)節(jié)：在絕大多數(shù)書本上，凡談到配制流動相都會談到最后有一個過濾的步驟。

高效液相色譜從使用的實際情況來看有幾點需要注意:

（1）流動相過濾實際操作時由于不可能做到專瓶專用，容易造成的交叉污染，對于配比復(fù)雜的流動相影響更大。所以用完后一定要沖洗干凈。用前不放心的話也可以沖洗下。

（2）流動相過濾經(jīng)濟(jì)成本比較高。買一套過濾裝置要3000多元，且過濾器是比較容易損壞的設(shè)備。過濾片成本高，有些進(jìn)口的一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本。并且在使用過濾片時，有些會造成流動相的二次污染，原因在于不合格的過濾片。

（3）流動相過濾耗費時間長。使用溶劑過濾器有一個預(yù)清洗、裝備、使用、用后清洗，晾干的過程，至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。

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