干貨|核酸電泳解決方案

凝膠電泳是分子生物學(xué)中鑒定、量化和純化核酸的常用實(shí)驗技術(shù)。瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化核酸片段的標(biāo)準(zhǔn)方法，因其快速便捷和通用性廣，被廣泛應(yīng)用于核酸的分離和分析。

核酸在堿性緩沖液環(huán)境下帶負(fù)電荷，當(dāng)受到電場作用時會通過瓊脂糖凝膠介質(zhì)從負(fù)極（陰極）向正極（陽極）遷移，不同核酸分子片段由于分子和構(gòu)型不同，在電場中的泳動速率也不同，較短的碎片比較長的碎片移動得更快，從而能達(dá)到分離的效果。在凝膠中加入染料，可對分離的核酸進(jìn)行檢測，加入Marker可以相對確定片段的大小。

那么，進(jìn)行核酸電泳實(shí)驗有沒有什么小妙招呢？今天，莫納麗莎就來為大家介紹一下——如何進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的瓊脂糖凝膠電泳操作！滿滿的干貨，為你的實(shí)驗全面助力！

一、準(zhǔn)備工作
在正式開始電泳實(shí)驗之前，首先要進(jìn)行必要的準(zhǔn)備工作：
01明確樣品信息與電泳信息
樣品信息確定DNA樣品或者RNA樣品數(shù)量，片段的大小，濃度；
電泳信息確定膠濃度、制膠大小以及電泳條件。

我們要先根據(jù)所分離片段大小的不同，明確最適宜的瓊脂糖濃度。下表就為大家列出了不同瓊脂糖凝膠濃度所對應(yīng)的線性DNA最佳分辨范圍：

02樣品準(zhǔn)備
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測配制PCR體系，PCR儀上運(yùn)行程序，反應(yīng)完成后取出；
酶切產(chǎn)物檢測配制酶切體系，利用水浴鍋或者金屬浴進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)完成后取出；
總DNA/RNA檢測提取核酸樣品，在DNA樣品或者RNA樣品中加入上樣緩沖液（loading buffer），混勻備用。
03確認(rèn)儀器
確認(rèn)電泳相關(guān)儀器可正常使用，包括水平電泳槽、電泳儀電源等。

二、開始電泳實(shí)驗
01制膠
以制作1%的膠為例，稱取0.5g瓊脂糖加入50ml 1.0×TAE緩沖液，放入微波爐里加熱至瓊脂糖全部熔化，取出搖勻。然后向冷卻至50-60℃的瓊脂糖膠液中加入核酸染料溶液（或者電泳后用染料溶液浸泡染色）。再將瓊脂糖小心倒入膠槽內(nèi)，插好梳子（注意保證制膠模具和梳子的潔凈）。
室溫下20~30分鐘后凝膠完全凝結(jié)，小心拔出梳子，將凝膠安放在電泳槽內(nèi)，向槽內(nèi)加入1.0×TAE稀釋緩沖液至液面恰好沒過膠板上表面。
02上樣
用微量移液槍將樣品小心加入樣品槽中，總體積不可超過樣品槽容量。注意上樣時小心操作，避免損壞凝膠或?qū)悠凡鄣撞磕z刺穿。
03電泳
蓋好電泳上蓋，接通電源，切記DNA樣品由負(fù)極往正極泳動。一般當(dāng)溴酚藍(lán)條帶移動到距凝膠前沿約2cm時，停止電泳。未加染料的膠在電泳完畢后移核酸溶液中，室溫下染色10~30分鐘。

依照核酸片段大小進(jìn)行分離

04凝膠成像與條帶分析

瓊脂糖凝膠電泳成像圖片
縱然每個人都希望得到完美的電泳條帶，但是在實(shí)際的實(shí)驗中還是會遇到各種各樣的問題，導(dǎo)致跑出的結(jié)果不盡人意。
為此，莫納麗莎總結(jié)了一些核酸電泳的常見問題與解決方案，希望可以給到大家一些幫助。以下是不是也有你正在苦苦追尋的答案呢？一起來看看吧！

三、常見問題與解決方案
Q1無條帶或幾乎看不到條帶

Q2條帶拖尾、彌散或分離效果不佳

Q3分離或遷移異常

好了，今天的核酸電泳解決方案就分享到這里啦！不知道大家是否在這篇干貨里找到自己實(shí)驗的影子呢？
歡迎莫粉兒們留言分享自己的實(shí)驗心得與體會，讓我們都在共同得交流學(xué)習(xí)中成為更出色的科研人！

還有更多關(guān)于電泳儀的問題歡迎聯(lián)系集思。

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